目前 DNA 定序技術在生物學研究中的應用日益增長。此種增長的一個重要推動力是次世代定序（NGS），這是一種現代 DNA 定序技術，用於實現人類、各種動植物和微生物物種的全 DNA 序列定序或基因圖譜繪制。

NGS 操作便捷、效果可靠，經濟實用。但這些優勢同樣取決於被定序的 DNA 的質量。在定序過程中初期，樣本的質量或效率低下可導致後期實驗因錯誤頻繁甚至不得不重做或其他浪費而額外消耗大量成本。DNA 定序技術推動著標靶藥物的開發、測試與製造以及對危險病毒與流行病的追蹤與管制。作為行業鏈上游的科研人員，我們不應嘗試旁門左道，絕不能為了走捷徑而使下游眾多的同仁與患者承受本不該有的風險。

純化取試劑組的使用是 NGS 過程中舉足輕重的一步。這一步對效率和質量有直接影響，對下游操作的影響也很關鍵。顯然，如果僅僅為了節省每份樣本的檢測成本而選擇使用便宜但性能低、質量差、效率低的試劑組，這樣可能會危害整個 DNA 定序工作甚至所有下游操作，這樣的行為是得不償失的。

因此，無論是在開始 NGS 操作時，還是在考慮更換不同的 DNA 純化定序試劑組時，在選擇前對試劑組加以考察，並將其整體性能與其他試劑組進行對比是至關重要的。雖然純化試劑組的價格是每個實驗室採購時的考量指標之一，但換成價格更低廉的產品或其他產品不一定會帶來更多的優勢，只注重價格可能會導致非常嚴重的後果。

因素 1 - 產出

第一個也是最顯而易見的因素是產出率，即最終 DNA 濃度除以起始 DNA 濃度再乘以 100％。為達到最佳的純化質量和效率，產出率應介於 80%～95% 之間。產出率低可能會影響下游的數據質量。並非所有的提取試劑組都能維持較高的產出率（見圖 1）。

因素 2 - 純度

優質 DNA 的 A260/A280 比值應至少為 1.8。比值偏低則說明存在蛋白質污染。同樣，A260/A230 比值小於 2.0 則表明存在其他污染物。

因素 3 - 時間

通常時間是最寶貴的資源。純化操作耗時越短越好。使用試劑組建庫時，每次需要額外的清理步驟，使用 30 分鐘的操作流程與 45 分鐘操作流程（請參見圖 2）之間的時間差就又增加了一倍。例如，3 次清理意味著 1.5 小時和 2.25 小時之間的耗時差別。隨著 NGS 總體操作的增加，這種差異會成倍增加。

因素 4 - 可預期性能

DNA 片段大小的均一性影響著 DNA 定序的質量和效率。當添加接頭至 DNA 片段中進行定序時，必須準確確定初始片段的大小，以添加一定長度的鹼基對（bp）。理想情況下，在各種結合率下，片段大小應當仍可預期且維持在較高濃度（參見圖 3 中 AMPure XP 的圖表）。如果用戶正在考慮更換純化試劑組，這是一個重要的考量因素。以下軌跡顯示了峰值高度和回歸後曲線的相對高度差（圖 3）。

因素 5 - 更換風險

如以上例子所述，不同提取試劑組的結合率不同，因而所得 DNA 片段的大小與濃度也不同，這是更換純化試劑組的風險之一。其他風險包括：

• 評估新純化試劑組需要額外付出的時間和精力
• 如果新產品的性能不及原產品，則未來須重新定序的風險
• 如果使用了該文庫試劑組供應商不推薦使用的提取用品來進行“仿單外”操作，供應商可能會撤回其相關用品的供應

結論

廉價的 DNA 定序純化試劑組的性能可能很差，且會損害 NGS 的總體結果。所承擔的風險包括耗費無效時間、效率不理想和結果不完整。

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