RNAdvance Blood 試劑組性能和數據
從 RNA 採血管中萃取 RNA
RNAdvance Blood試劑組是基於 SPRI 磁珠技術的核糖核酸 （RNA） 萃取試劑組。它能夠從使用 PAXgene 管採集的血液中純化高質量的 RNA。可以使用 2 mL 管或 96 孔盤手動操作，或在貝克曼庫爾特 Biomek 液體處理工作站進行 96 孔盤自動化操作。使用 RNAdvance Blood 試劑組從 PAXgene 保存的血液中萃取總 RNA，無 gDNA 殘留和其他 PCR 抑制劑。
- 與基於 PCR 的下游檢測兼容
- 生產高質量的 RNA
- 高效移除基因體 DNA 和其他污染物
穩定的樣本 RNA 萃取完整性
同一捐贈者同一天採集的三個不同的樣品。所有樣本在抽血後 6 小時內進行製備，在萃取 RNA 之前，血液保存在冰上或 4°C 環境中。RIN 分數平均為 9.4，9 個樣本的標準偏差為 0.4。使用生物分析儀 6000 RNA Nano Assay（Agilent） 評估 RIN 分數。
相較其他供應商競爭產品，RNAdvance Blood 試劑組萃取更高產量 RNA
在圖 3（下圖）中，使用 NanoDrop（Thermo Fisher ）對樣本進行定量。RNAdvance Blood 試劑組分離的 RNA 比供應商 B 和 C 同類競爭試劑組多兩倍。在圖 4（下圖）中，使用 NanoDrop（Thermo Fisher）評估樣品的純度。Error bar 表示三個重復的標準差。RNAdvance Blood 試劑組萃取 RNA，適用於下游應用。
RNAdvance 試劑組提供穩定的性能
在圖 5（下圖）中，在 24 小時內，從 2 個不同用戶的 6 個捐贈樣品中萃取 RNA。樣品使用 NanoDrop（Thermo Fisher）進行定量。兩位用戶萃取的 RNA 總量相似。Error bar 表示三個重復的標準差。
RNAdvance 試劑無 DNA 和 PCR 抑制劑殘留
通過 qPCR 評估擴增 DNA 的能力。採用引子（正向引子 5’-ggacttcgagatag-3’ 和反向引子 5’-agcactgttgcgtacag-3’）擴增 (β)-actin 基因（ActB）的第 4 個和第 5 個外顯子，產生 327bp 擴增子。在圖6（下圖）中，無 RT 控制還表明了無干擾下游 RNA 應用的 DNA 殘留。在圖7（下圖）中，使用 RNAdvance Blood 試劑組萃取的 RNA 可擴增，表明該試劑組去除了 PCR 抑制劑。
RNAdvance 試劑組從 PAXgene 管中採集的長達 4 天的血液中提取出高品質 RNA
從捐贈 4 天內 6 個捐贈樣品中萃取RNA。血液採集在 PaxGene RNA 管中，儲存在 4°C 環境中。在圖 8（下圖）中，從 400 μL 的血液中萃取的 RNA 產量維持在 1 μg。第 2 天至第 4 天的捐獻樣品RNA 萃取差異比在第 1 天的 RNA 萃取差異更大。在圖 9（下圖）中，萃取的 RNA純度在 4 天內沒有顯著變化，且可用於下游應用。Error bar 表示三個重複的標準差。
工作流程圖
- 將 PAXgene 管中收集的血液在裂解緩沖液和蛋白酶 K 中裂解
- 將 RNA 與磁珠結合
- 將磁珠與雜質分離
- 用洗滌緩衝液和 70% 乙醇清洗磁珠，去除雜質
- 使用 DNase I 處理樣品
- 使用 Bind 2 緩沖液將 RNA 與磁珠重新結合
- 用 70% 乙醇清洗磁珠，去除雜質
- 從磁珠中洗脫 RNA
- 轉移到新的孔盤
與管柱萃取法的試劑組相比，使用 Genomics RNAdvance 血液試劑組可用更少的移液器操作從樣品中萃取 RNA
圖 10（上圖）表示使用 RNAdvance Blood 試劑組或管柱萃取法的試劑組萃取 1 至 96 個樣本的 RNA 的總時間。即使是從 15 個樣本中萃取血液中的 RNA，採用 RNAdvance Blood 試劑組進行操作的總耗時依舊更短。 在圖 11（上圖）中，完成 1、8、24、48 和 96 個樣本所必需移液器操作的總次數，包括加樣、混合樣品和丟棄Tip。與管柱萃取法試劑組相比，使用多通道移液器大大減少了需要執行的移液器操作。
根據批次大小或整體實驗通量的手動操作或自動化方法應用
使用 RNAdvance Blood 試劑組進行 8、24、48 和 96 個樣本的 RNA 萃取所需的預估動手時間和總時間（以小時計數）。這些方法可以手動操作，也可以在液體處理工作站上自動執行。此表中表示的數據基於 Biomek i7 Hybrid 基因體工作站。展現手動和自動化之間的耗時差異（NR指“不推薦”）。
| RNAdvance Blood | Manual | Automated | ||
|---|---|---|---|---|
| Batch Size | 8 | Hands-on-Time | 1.00 | 0.25 |
| Total Time | 1.50 | 2.50 | ||
| 24 | Hands-on-Time | 1.50 | 0.25 | |
| Total Time | 2.00 | 2.50 | ||
| 48 | Hands-on-Time | NR | 0.25 | |
| Total Time | NR | 2.50 | ||
| 96 | Hands-on-Time | NR | 0.25 | |
| Total Time | NR | 3.00 | ||
RNAdvance Blood 試劑組用於從血液中萃取 RNA
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| PART # | NAME | PREPS |
|---|---|---|
| A35603 | RNAdvance Blood Kit | 50 |
| A35605 | RNAdvance Blood Kit | 96 |
| A35604 | RNAdvance Blood Kit | 384 |
* 未用於或驗證用於疾病或其他條件的診斷。
* 貝克曼庫爾特，特有標識，和貝克曼庫爾特產品和服務標誌，這裡提到的是貝克曼庫爾特公司在美國和其他國家的商標或註冊商標。所有其他商標歸屬於相應所有者公司。
