RNAdvance Cell v2 試劑組的性能和數據

從培養的真核細胞中萃取並純化總 RNA

RNAdvance Cell v2 試劑組是基於 SPRI 磁珠技術的核糖核酸 （RNA） 萃取試劑組。它能夠從細胞系中純化高質量的 RNA。可以使用 2 mL 管或 96 孔盤手動操作，或在貝克曼庫爾特 Biomek 液體處理工作站進行 96 孔盤自動化操作。使用 RNAdvance Cell v2 試劑組提取的總 RNA 無 gDNA 和其他 PCR 抑制劑殘留。

  • 有效去除基因組 DNA 和其他雜質
  • 從培養細胞中萃取和純化高質量總 RNA 以滿足基因表達檢測需求

 

通過 RNAdvance Cell v2 試劑盒高回收 RNA

採用 RNAdvance Cell v2 試劑組和其他供應商試劑組從 MRC-5 細胞萃取 RNA。在圖 1（下圖）中，使用 Nanodrop（Thermo Fisher Scientific）對樣本進行定量，結果表明，採用 RNAdvance Cell v2試劑組，比其他三個供應商競爭試劑組，可回收更多的RNA。在圖 2（下圖）中，使用 Nanodrop（Thermo Fisher Scientific）評估樣品的純度。對於 MRC-5 細胞，RNAdvance Cell v2 試劑組以A260/280 的比值滿足需求。  

Genomics RNAdvance Cells Yield and Purity

 

RNA 可從各種細胞中萃取

採用 RNAdvance Cell v2 試劑組從 5x104 MRC-5、ACHN、HCT116 和 PANC1 細胞中萃取 RNA，採用 NanoDrop（Thermo Fisher Scientific）進行定量和純度評估。RNA 的產量取決於細胞系，但RNA 的質量在所有細胞系之間是穩定一致的，並且在合理的 A260/280 比值範圍。

Cell Type Yield (µg) A260/A280
MRC-5 1.8 2.02
ACHN 0.5 1.98
HCT116 0.3 2.00
PANC1 1.0 1.93

 

從各種細胞中分離出具有平均 RIN 分數 9.8 的高質量RNA

RNAdvance Cell v2 試劑組可萃取高質量 RNA。從 MRC-5、ACHN、HCT116 和 PANC1 細胞中萃取的總 RNA，並和 universal human reference RNA (Agilent) 一起使用 Agilent RNA Screen Tape 檢測，以評估質量。在圖 3（下圖）中，所有採用 RNAdvance Cell v2 試劑萃取的樣本的 RIN 值均 ≥ 9.4，表明已回收高質量且完整的 RNA。圖4（下圖）顯示了電泳第一通道對應的 MRC-5 細胞中萃取的 RNA 峰圖；如圖示，18s 和 28s rRNA 峰值顯著。

Genomics RNAdvance Cells RIN Scores

 

有效去除基因體 DNA 和 PCR 抑制劑，實現在 qRT-PCR 應用中獲取高質量數據和實驗結果

Genomics RNAdvance Cells Amplification

Genomics RNAdvance Cells qRT PCR AmplifiabilityPCR 的能力透過 qRT-PCR 評估，採用引子（正向引子 5’-ggacttcgagatag-3’ 和反向引子 5’-agcactgttgcgtacag-3’）擴增 (β)-actin 基因（ActB）的第 4 個和第 5 個外顯子，產生 327bp 擴增子。無 RT 對照顯示可干擾下游 RNA 應用的 DNA 已被去除。在圖 6（上圖）中，使用 RNAdvance Cell v2 試劑組從 4 個細胞系分離的 RNA 可擴增，表明該試劑組去除了 PCR 抑制劑。在圖 7（右圖）中，使用 RNAdvance Cell v2 試劑組和 3 個其他競爭供應商試劑組從 ACHN 細胞中萃取的 RNA，應用於 qRT-PCR（添加和不添加反轉錄酶）。RNAdvance Cell v2 試劑組和競爭供應商 A 和 B 的試劑組已有效去除大部分 DNA，但供應商 C 的試劑組在有反轉錄酶和無反轉錄酶的情況下仍舊具有同等的擴增效力，表明樣本存在 DNA 污染物。

 

 

工作流程圖

Genomics RNAdvance Cell v2 Workflow

  1. 在裂解緩衝液和蛋白酶K中裂解細胞
  2. 將 RNA 與磁珠結合
  3. 將磁珠與雜質分離
  4. 用洗滌緩衝液和 70% 乙醇清洗磁珠，去除雜質
  5. 使用 DNase I 處理樣品
  6. 用洗滌緩衝液將 RNA 重新結合到磁珠中
  7. 用 70% 乙醇清洗磁珠，去除雜質
  8. 從磁珠中洗脫 RNA
  9. 轉移到新的孔盤

 

與管柱萃取法的試劑組相比，採用Genomics RNAdvance Cells試劑組在實驗中可購過更少的移液器操作從樣品中萃取RNA

Genomics RNAdvance Cells Total Time and Pipette Mixing

圖 8（上圖）表示使用 RNAdvance Cell v2 試劑組或基於管柱的供應商試劑組萃取 1 至 96 個樣本的 RNA 的總耗時。從 30 個樣本中萃取細胞內的 RNA 的總耗時在採用 RNAdvance Cell v2 試劑組的情況下更短。在圖 9（上圖）中，處理 1、8、24、48 和 96 個樣本時移液器操作的總次數（包括加樣、混樣和丟棄Tip等）。與管柱萃取法的競爭供應商試劑組相比，採用多通道移液器大大減少了需執行移液器操作的步驟。

 

根據批次大小或整體實驗通量所涉及的手動或自動化方法的應用

預估用於 8、24、48 和 96 個樣本的 RNA 提取所涉及的動手時間和總時間（按小時）。該方法可以在 Biomek i7  Hybrid 自動化工作站上手動或自動執行。顯示手動和自動化之間的耗時差異（NR指“不推薦”）。

RNAdvance Cell v2 Manual Automated
Batch Size 8 Hands-on-Time 0.25 0.25
Total Time 1.15 2.43
24 Hands-on-Time 0.25 0.25
Total Time 1.30 2.50
48 Hands-on-Time NR 0.50
Total Time NR 2.86
96 Hands-on-Time NR 0.50
Total Time NR 3.08

 

用於從細胞內萃取 RNA 的 RNAdvance Cell v2 試劑產品

RNAdvance Cell v2 試劑組根據您的實驗通量需求提供兩種試劑組規格。點擊下方任意一個產品貨號進行購買或詢價。想要瞭解更多信息，請瀏覽我們關於 RNAdvance Cell v2 試劑盒用於細胞 RNA 萃取的相關網頁。

PART # NAME PREPS
A47942 RNAdvance Cell v2 Kit 100
A47943 RNAdvance Cell v2 Kit 960

 

 

* 未用於或驗證用於疾病或其他條件的診斷
* 貝克曼庫爾特，特有標識，和貝克曼庫爾特產品和服務標誌，這裡提到的是貝克曼庫爾特公司在美國和其他國家的商標或註冊商標。所有其他商標歸屬於相應的所有者公司。

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